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口腔肿瘤细胞培养和分析

文章来源:未知 发布日期:2021-11-18 16:20 点击次数:

1.口腔肿瘤细胞的取材方法


    培养肿瘤细胞的材料一般来自患者,对实体瘤患者可取原发肿瘤组织或转移灶,进行培养。取术后或活检标本,尽早浸入无血清培养液保鲜,尽快培养。尽可能去除溃疡及坏死组 织,避免细菌、真菌污染,对取自外露的肿瘤组织,应在培养前在含两性霉素B 2/g/ml、青霉 素200〜1000U/ml、链霉素500昭/ml培养液中浸泡10〜20分钟,再用洗液反复冲洗干净后再培养。
 
 

2.肿瘤细胞的培养方法


    口腔肿瘤细胞对培养基要求不如正常细胞严格,一般常用RPM1640培养基,血清浓度不 高(10%即可),建议在原代培养时最好能加入生长因子或患者血清(1%〜2%),促进细胞生 长。培养方法很多,主要有组织块法、酶消化法、钮网法、脱落细胞法等。原代细胞的培养方法 如下:

    1. 组织块培养法将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分,在平皿中用Hanks 液洗3次,剪碎组织,切成1〜2mm3小块,接种于事先涂有鼠尾胶原的培养瓶(或皿)中,37°C、5%CO2孵箱内培养。

    2. 酶消化法在剪碎的组织块中加入0. 25%胰蛋白酶或2000U/ml胶原酶,37°C水浴消 化30分钟(或更长一些),待见组织呈云雾状即可去除消化液,用洗液洗3次,培养液洗
后,用完全培养基悬浮,并用吸管吹打分散制成细胞悬液,计数。接种密度为5X108〜10X 108/L细胞浓度,培养液为含10%胎牛血清RPMI1640C或Eagle MEM或DMEM),37°C、 5% CO2孵箱内培养。

    3. 锂网培养法 在一张面积约为1cm2担网上放入剪碎的一块或几块肿瘤组织块(1〜 2mm3大小),用镶子轻压,使其粘于网上,再把担网放入培养皿中,使组织块与皿壁紧紧接触, 于37°C 5% CO2条件下培养,每隔2〜3天换液一次,约1周后可见上皮细胞移出,并形成纯净 的单层上皮细胞。

    4. 脱落细胞法 将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织,洗液洗2次后,用刀片将肿瘤 组织切成细薄片,在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来,脱落细胞经洗涤后,加入完全培养 基,便可获得较纯的上层细胞,接种于培养瓶(或皿)中,37°C、5% CO2条件下培养,每隔2〜3 天换液,7〜10天上皮细胞可以长成单层。