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在作淋巴瘤免疫组化染色时应注意哪些事项？

文章来源：WU 发布日期：2021-10-01 点击次数：(440)次

1、淋巴组织块不能太厚


　　组织块不能太厚，一般为2cm左右。选择合适的固定剂，固定液浓度和pH值。一般用10%中性甲醛，因其对肽和蛋白质抗原的固定效果好。

 

 

２、淋巴组织需连续切片


　　连续切片，厚3um，不能有皱褶、刀痕、展片的水温不能太高（45℃以下），目的是避免切片因蜡融化而散开。
 

３、淋巴组织在染色前脱蜡必须彻底


　　在染色前脱蜡必须彻底。二甲苯、乙醇要勤换，否则脱蜡不彻底会影响标记结果，导致假阴性或假阳性表达。
 

４、抗原修复


　　抗原修复：因组织在福尔马林固定过程中，会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，导致许多抗原决定簇被封闭，抗体难以和抗原充分结合。而加热可水解该桥连使抗原被激活，因此大部分免疫组化标记都要进行组织抗原修复。不同pH值的抗原修复液对染色的影响也不同。常用的抗原修复液有pH 6.0的枸椽酸缓冲液，pH 9.0的1mM EDTA。

 

 

５、显微镜下控制显色时间


　　在整个免疫组化操作过程中，要保持组织片不干燥，避免假阳性的出现。显微镜下控制显色时间。易表达，背景深的抗体显色时间要短，难表达，背景浅的显色时间长些。

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