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在作淋巴瘤免疫组化染色时应注意哪些事项?

文章来源:未知 发布日期:2021-10-01 15:11 点击次数:

1、淋巴组织块不能太厚


  组织块不能太厚,一般为2cm左右。选择合适的固定剂,固定液浓度和pH值。一般用10%中性甲醛,因其对肽和蛋白质抗原的固定效果好。

 

 

2、淋巴组织需连续切片


  连续切片,厚3um,不能有皱褶、刀痕、展片的水温不能太高(45℃以下),目的是避免切片因蜡融化而散开。
 

3、淋巴组织在染色前脱蜡必须彻底


  在染色前脱蜡必须彻底。二甲苯、乙醇要勤换,否则脱蜡不彻底会影响标记结果,导致假阴性或假阳性表达。
 

4、抗原修复


  抗原修复:因组织在福尔马林固定过程中,会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连,导致许多抗原决定簇被封闭,抗体难以和抗原充分结合。而加热可水解该桥连使抗原被激活,因此大部分免疫组化标记都要进行组织抗原修复。不同pH值的抗原修复液对染色的影响也不同。常用的抗原修复液有pH 6.0的枸椽酸缓冲液,pH 9.0的1mM EDTA。

 

 

5、显微镜下控制显色时间


  在整个免疫组化操作过程中,要保持组织片不干燥,避免假阳性的出现。显微镜下控制显色时间。易表达,背景深的抗体显色时间要短,难表达,背景浅的显色时间长些。