1.对免疫功能的影响
( 1 )对非特异性免疫的影响:小鼠灌服绞股蓝煎剂10g/kg或30g/kg ,连服10日,可明显增加脾脏重量,体重亦比对照组明显增加,能明显促进单核巨噬细胞系统对血中肜体碳的廓清速率,提高单核细胞的吞噬功能, 30g/kg剂量亦可使胸腺重量增加。a-半乳糖诱发的小鼠亚急性衰老模型,灌服3%绞股蓝浸膏(含生药150% )混悬液,连服0日,可使明显升高的白细胞总数、淋巴细胞的百分率降低至接近对照组;使降低的中性粒细胞百分率升高至接近对照组;模型组胸腺萎缩,脾重增加,用药后胸腺指数恢复,并超过对照组,脾指数也恢复正常; 模型组血清溶菌酶含量显著降低,提示机体抗感染力下降,服药组溶菌酶含量显著增加并超过对照组。小鼠灌服GPs60mg/kg或100mg/kg ,连服7日可明显提高外周血白细胞数,并增强其吞噬酵母多糖时的化学发光峰值,同时发光指数(发光峰值/白细胞数)也明显提高:对醋酸泼尼松诱发免疫抑制的小鼠灌服GP80mg/kg或120mg/kg ,连服7日,白细胞数、发光峰值和发光指数的提高更为显著,提示GPs不仅能升高正常动物白细胞数,而且能使- -些白细胞数低下的动物白细胞数回升,增强正常或功能低下的白细胞吞噬功能。
( 2 )对淋巴细胞转化和IL-2分泌的影响:绞股蓝水煎醇沉水提物10μml、100μg/ml及1000μg/ml时,均可提高刀豆球蛋白A ( ConA )及脂多糖( LPS )诱导的小鼠脾脏和淋巴细胞的增殖反应。GPs 10 ~ 200μg/ml能刺激大鼠和小鼠脾淋巴细胞自发性
( 3H )胸腺嘧啶核苷( H3-TdR )掺入,与次亚适量ConA配伍,可协同刺激小鼠脾淋巴细胞掺入。
( 3 )对体液免疫功能的影响:小鼠灌服绞股蓝煎剂10g/kg或50g/kg ,连服8日,可明显提高血清中对绵羊红细胞( SRBC )特异性抗体溶血素的含量。小鼠灌服绞股蓝水煎醇沉水提物0.5g/ kg、1.0g / kg或2.0g/kg ,连服5日,对SRBC免疫小鼠能促进脾脏抗体分泌细胞( PFC )的形成, 2g/kg才能促进溶血素的形成。小鼠灌服GPs 100μg/kg ,连服10日,对SRBC免疫小鼠溶血素水平呈双相调节作用,对环磷酰胺起的溶血素水平下降有明显对抗作用,但未恢复至正常水平。另有报道小鼠灌服GPs 400mg/ kg ,连服5日,对正常动物SRBC诱发的溶血素无明显影响,但对荷瘤(肉瘤180 )小鼠或地塞米松诱发的免疫功能低下大鼠, SRBC产生的溶血素和PFC减少,灌服GPs均有显著的保护作用。小鼠灌服GPs 300mg/kg ,连服7日,可显著升高血清lgG含量,广西另一地区 所产绞股蓝分离的GPs则使IgG和1gM含量均显著升高。尚有报道,小鼠灌服绞股蓝煎剂29g/kg ,连服25日,可降低脾脏抗体形成细胞数,还可降低小鼠外周血抗SRBC抗体滴度。
( 4 )对细胞免疫功能的影响:小鼠灌服绞股蓝煎剂10g/kg、30g/kg ,连服12日,对二硝基氯苯( DNCB )引起由T细胞介导的迟发型皮肤超敏反应有明显增强作用。小鼠灌胃GPs 200mg/kg或400mg/kg ,连服10日,对环磷酰胺引起的E -玫瑰花形成率的降低有明显对抗作用,可使其恢复至正常水平,灌服GPs 50mg/ kg ,连服10日,对正常小鼠E-玫瑰花形成率呈双相调节作用。
(5 )对自然杀伤细胞( NK )的影响: GPs 100μg/ml、 200μg/ml时对人外周血NK细胞活性有加强作用,但400μg/ml时则反有抑制作用。小鼠灌胃GPs 400mg/kg ,连服12日,对环磷酰胺所致脾NK细胞活性降低有显著拮抗作用。
2.抗肿瘤作用
( 1 )小鼠灌服GPs 50mg/kg ,连服7日,对小鼠肉瘤( S180 )可抑制瘤大小40%。小鼠灌服绞股蓝煎剂1g/kg、2g/kg ,连服10~ 12日,对S180组织匀浆接种于小鼠右腋下的肿瘤生长有明显抑制作用,抑制率分别达28.9%和38.1% ; 对S180插块移植的肿瘤生长,抑制作用较弱, 7.5g/kg时才有明显抑制作用。对腹腔接种白血病L615瘤株小鼠,灌服2g/kg ,连服7日,对匀浆法接种者生命延长率为37.4% (P<0.05 ) , 对插块法接种者生命延长率可达66.6% ( P <0.01) , 增加剂量至7.5g/kg时,生命延长率不仅不增加,反而减小至29.6%。灌服煎剂1 ~ 2g/kg ,对小鼠移植性肝癌无明显抑制作用。腹腔接种S180小鼠灌胃GPs 3mg/鼠,连服7日,可使每1ml腹水中瘤细胞数明显低于对照组,处于分裂中的细胞也明显减少,给药组处于DNA合成前期( G1期)细胞的百分率明显高于对照组,而处于DNA合成后期( S期)细胞百分率则明显低于对照组。提示GPs可明显抑制瘤细胞DNA合成。GPs对S180小鼠可明 显增加脾脏系数,但对胸腺系数无明显影响,外周血中细胞总数, TH细胞、B细胞总数, IgM、IgG均明显高于对照组。提示GPs不仅能提高细胞免疫功能,也增强体液免疫。
( 2 ) GPs的抗肿瘤作用:需要恰当的剂量,如小鼠灌服GPs 10日, 30mg/kg时,对S180抑瘤率达87.1% , 300mg/kg时抑瘤率只有61.1% , 600mg/kg时抑瘤率仅21.1%。在体外, GPs与S180细胞共同孵育5小时,取出用伊红染色(染成红色者为死亡细胞) , GPs浓度为0.38%时,赤染率54% ; 浓度为0.55%时,赤染率为82.7% ;浓度为0.75%时,赤染率为87.5%。提示GPs对S180细胞也有直接杀灭作用。艾氏腹水癌小鼠分别灌服绞股蓝地上部分煎剂(NGP1g/ml)和新鲜绞股蓝愈伤组织加水捣碎后过滤( FGP , 1g/ml ) 0.3ml /鼠,腹水型灌服15日,实体型灌服30日,对腹水型小鼠NGP和FGP可使其生命延长率分别达40.7%和46.6% ;对实体型小鼠的抑瘤率分别达33.1%和36.2%。荷瘤(艾氏腹水癌)小鼠外周血酸性醋酸素酯酶( ANAE )阳性细胞率,对植物血凝素(PHA )的非特异性转化率均比正常小鼠低，服上述剂量FGA或NGP俏小鼠则明显升高上述两项指标,应用氟尿嘧啶或环磷酰胺的艾氏癌小鼠,脾淋巴细胞中ANAE阳性率、对PHA的非特异性转化以及NK细胞对艾氏癌细胞的毒性均降低,而服用FGP或NGP的小鼠,对上述三项指标均显著升高。
( 3 )绞股蓝水煎醇沉提取物5mg生药/ mI可使培养的人体肝癌细胞株SMMC-7721细胞变圆,胞膜变厚,且脱落呈悬浮状。采用二乙基亚硝胺( DEN )致大鼠肝癌前病变的模型,如饲以含GPs饲料(饲料中GPs浓度1.5g / kg或0.48g/kg )共服14日,对DEN致肝癌的发生有抑制作用。GPs在体外1 ~ 10μg/ml时对肺癌细胞株A549、Calu1、 592/ 9的抑制作用明显强于宫颈癌Hela S3及结肠腺癌Colo205 ,而同样浓度GPs对正常人混合淋巴细胞不但无抑制作用,却有促进细胞增殖的作用。绞股蓝提取液( 1.0g生药/ ml含皂苷6.44mg/ml ,多糖10.697mg/ml )在1 ~ 20μl/ ml时,对人大肠癌细胞( Hce8693 )的DNA合成有抑制作用,且与剂量相关,但在较高浓度时,对正常成纤维细胞亦有抑制作用,浓度低于10μl / ml时,对大肠癌细胞有抑制作用,对正常成纤维细胞无不良影响。凡是在达玛烷型骨架上的C20或C21.上有游离羟基的皂苷,对培养的肺癌、子宫癌、色素肿瘤细胞均有抑制效果,而对正常细胞的增殖则无不良影响。
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